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Super Fluor 488（效果同Alexa Fluor 488）琥珀酰亚胺酯

货号：106642 编号：XFBM70-2

CAS号：规格：激发波长（Ex）：~495 nm

包装：1mg 保质期：360天

保存条件：-20℃干燥避光保存

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Super Fluor 488 琥珀酰亚胺酯（Super Fluor 488 Succinimidyl Ester，简称 Super Fluor 488 SE）是氨基反应性荧光标记试剂，核心功能与 Alexa Fluor 488 SE 一致 —— 通过琥珀酰亚胺酯（NHS 酯）基团与生物分子（如抗体、蛋白、肽、氨基修饰核酸）的游离氨基（-NH₂）发生共价反应，实现荧光标记。其设计既保留了 Alexa Fluor 488 SE 的高标记效率、优异光学性能，又在成本或溶解性上可能具备优势，是生物医学研究中 “氨基靶向荧光标记” 的常用工具。

一、核心特性（与 Alexa Fluor 488 SE 高度匹配）

特性类别	具体参数 / 优势
反应特性	- 靶向基团：琥珀酰亚胺酯（NHS 酯），仅与游离氨基（如赖氨酸残基的 ε-NH₂、N 端 α-NH₂）反应，反应条件温和（pH 7.0-8.5，室温即可）； - 反应产物：形成稳定的酰胺键（-CONH-），标记后生物分子活性保留率高（避免非特异性结合）； - 溶解性：通常需用少量无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）预溶，再加入 aqueous 缓冲液（如 PBS）进行标记反应（避免直接溶于水，否则 NHS 酯会水解失效）。
光学性能	- 激发波长（Ex）：~495 nm，发射波长（Em）：~518 nm（绿色荧光），完美适配流式细胞仪、共聚焦显微镜、荧光酶标仪的 488 nm 激光通道； - 荧光量子产率：≥0.9（亮度高，信号信噪比优）； - 光稳定性：抗光漂白能力强（接近 Alexa Fluor 488 SE），适合长时间成像（如活细胞动态追踪）； - pH 耐受性：pH 4.0-9.0 范围内荧光强度稳定（避免传统荧光素在酸性条件下的荧光淬灭）。
生物适用性	- 低毒性：标记后的生物分子（如抗体、蛋白）对细胞毒性低，可用于活细胞标记或体内示踪； - 标记效率：1 个生物分子可结合多个 Super Fluor 488 基团（“标记比率” 可通过反应浓度调控，通常抗体标记比率 2-6 为宜，避免过高导致聚集或活性下降）。

二、主要应用场景

基于 “氨基靶向标记” 的特性，其应用与 Alexa Fluor 488 SE 完全重叠，核心场景包括：

抗体 / 蛋白标记：标记一抗或二抗，用于免疫荧光（IF，检测细胞内蛋白定位）、免疫组化（IHC，检测组织切片中蛋白表达）、免疫印迹（WB，荧光法检测蛋白条带）；标记亲和蛋白（如链霉亲和素、卵清蛋白），用于靶向结合生物素化分子。
肽 / 小分子标记：标记含氨基的肽段（如细胞穿透肽、信号肽）或小分子药物，追踪其在细胞内的转运路径或体内分布。
核酸标记：标记氨基修饰的 DNA/RNA 探针（如 FISH 探针），用于荧光原位杂交（FISH），分析染色体异常或基因表达位置。
微球 / 载体标记：标记氨基修饰的纳米微球、脂质体或病毒载体，通过荧光信号追踪载体的细胞摄取效率或体内靶向性。

三、关键使用步骤（以抗体标记为例）

标记过程需严格控制反应条件，避免 NHS 酯水解或生物分子变性，核心步骤如下：

预处理生物分子：

将待标记抗体（或蛋白）用无氨基缓冲液透析（如 0.1 M NaHCO₃缓冲液，pH 8.0-8.5，或 PBS pH 7.4），去除溶液中的游离氨基（如 Tris、甘氨酸，会竞争结合 NHS 酯，降低标记效率）。

溶解染料：

取 Super Fluor 488 SE 粉末，用无水 DMF 或 DMSO 溶解（浓度建议 10-20 mg/mL，现配现用），避免水或含羟基的溶剂（会导致 NHS 酯水解）。

反应与孵育：

按 “染料：抗体” 摩尔比 5:1 至 20:1 加入染料溶液（根据目标标记比率调整，抗体浓度通常为 1-10 mg/mL），室温避光孵育 30-60 分钟（轻柔振荡）。

终止反应与纯化：

加入终浓度 50 mM 的 Tris-HCl（pH 8.0）或 100 mM 的甘氨酸，室温孵育 10 分钟，终止反应（游离氨基与剩余 NHS 酯结合）；
通过凝胶过滤柱（如 Sephadex G-25）或超滤管（30 kDa 截留分子量，针对抗体）纯化，去除未结合的游离染料（避免非特异性荧光干扰）。

验证与保存：

检测标记后抗体的荧光强度（用荧光分光光度计）和活性（如 ELISA 或流式细胞术验证结合能力），合格后按储存条件保存。

四、储存条件（比普通 Super Fluor 488 更严格，因 NHS 酯易水解）

Super Fluor 488 SE 的琥珀酰亚胺酯基团对水极敏感，易水解失效，因此储存条件需更严苛：

粉末状态（未溶解）：

核心条件：-20℃ 或 -80℃ 冷冻、避光、绝对干燥（优先 - 80℃，稳定性更优）；
包装要求：需密封于惰性气体（如氩气、氮气）环境中，使用棕色避光瓶 + parafilm 密封瓶口，避免反复开启（每次开启需快速操作，防止吸潮）；
稳定性：未开封且严格遵循条件时，可稳定保存 12-24 个月；开封后建议 1 个月内用完，剩余粉末需立即密封放回 - 80℃。

溶解后状态（储备液）：

仅建议短期储存（≤1 周）：用无水 DMF/DMSO 溶解为 10-20 mg/mL 储备液，分装为小体积（如 10 μL / 管，避免反复冻融），置于 -20℃ 避光；
禁忌：溶解后禁止室温放置（DMF/DMSO 溶液中 NHS 酯仍会缓慢水解，室温 24 小时水解率可达 30% 以上），且不可用含水缓冲液稀释后长期保存。

五、使用注意事项（避开水解与非特异性标记）

全程避水：从染料溶解到反应前，所有容器（离心管、移液枪头）需烘干或用无水乙醇润洗后晾干，避免残留水分导致 NHS 酯水解；反应缓冲液需确保无氨基、无羟基（如避免用 Tris-HCl 缓冲液，优先用 NaHCO₃或 HEPES）。
控制 pH：反应体系 pH 需严格控制在 7.0-8.5——pH<7 时，氨基质子化（-NH₃⁺），无法与 NHS 酯反应；pH>9 时，NHS 酯水解速度急剧加快，同时生物分子可能变性。
标记比率优化：标记比率并非越高越好 —— 过高（如抗体标记比率 > 8）会导致抗体聚集、结合活性下降，或荧光自淬灭；建议通过预实验测试 2-6 的标记比率，选择 “荧光强度高且抗体活性保留好” 的条件。
避光操作：与所有荧光染料一致，标记过程及后续实验需全程避光（如用棕色离心管、实验台拉遮光帘），避免光漂白导致荧光信号下降。
安全防护：DMF/DMSO 为挥发性有机溶剂，且染料可能有刺激性，操作时需在通风橱内进行，佩戴手套、护目镜。

六、与 Alexa Fluor 488 SE 的对比（核心差异）

对比项	Super Fluor 488 SE	Alexa Fluor 488 SE
反应特性	氨基靶向（NHS 酯），反应条件、标记效率一致	氨基靶向（NHS 酯），行业金标准，反应稳定性略优
光学性能	光稳定性、荧光亮度、pH 耐受性接近	光稳定性略优（长期成像优势更明显）
溶解性	需无水 DMF/DMSO 预溶，与水混合后稳定性一般	需无水 DMF/DMSO 预溶，与水混合后稳定性略好
成本	相对经济（国产替代常见，性价比高）	较高（进口品牌，专利授权成本）
应用兼容性	完全适配 Alexa Fluor 488 的实验体系（仪器、抗体稀释液等）	广泛兼容商用实验体系，文献引用率高